Parafínové mikrotómy sú široko používané v histologických a patologických laboratóriách na prípravu tenkých tkanivových rezov zaliatych do parafínového vosku. Laserová záchytná mikrodisekcia (LCM) je výkonná technika, ktorá umožňuje izoláciu špecifických buniek alebo bunkových populácií z tkanivových rezov na následnú molekulárnu analýzu. Vynára sa otázka: Môže sa parafínový mikrotóm použiť na prípravu vzorky z mikrodisekcie laserovým záchytom? V tomto blogu túto tému podrobne preskúmame, berúc do úvahy možnosti parafínových mikrotómov a požiadavky na prípravu vzorky LCM.
Pochopenie parafínových mikrotómov
Parafínové mikrotómy sú presné nástroje určené na rezanie tenkých plátkov tkaniva zaliateho parafínom. Prichádzajú v rôznych typoch, vrátaneAutomatický mikrotóm,Poloautomatický mikrotómaRotačný mikrotóm. Tieto mikrotómy ponúkajú rôzne funkcie, ako je nastaviteľná hrúbka rezu, plynulé rezanie a schopnosť pracovať s rôznymi typmi tkanív.
Základný princíp parafínového mikrotómu spočíva v posúvaní tkanivového bloku smerom k ostrej čepeli, ktorá rozreže tkanivo na tenké rezy. Rezy sa potom plavia na vodnom kúpeli a prenesú sa na podložné sklíčka na ďalšie spracovanie. Kvalita rezov závisí od niekoľkých faktorov, vrátane ostrosti čepele, rýchlosti rezu a správnej orientácie tkanivového bloku.
Požiadavky na prípravu vzorky na mikrodisekciu laserového záchytu
Mikrodisekcia laserového snímania vyžaduje vysokokvalitné tkanivové rezy, ktoré sú tenké, ploché a bez artefaktov. Časti by mali byť pevne prilepené na sklíčko, aby sa zabránilo oddeleniu počas procesu LCM. Okrem toho by tkanivo malo byť dobre konzervované, aby sa zachovala integrita nukleových kyselín a proteínov pre následnú molekulárnu analýzu.
Ideálna hrúbka tkanivových rezov pre LCM je typicky medzi 5 a 10 mikrometrami. Hrubšie časti môžu sťažiť preparovanie jednotlivých buniek, zatiaľ čo tenšie časti môžu byť náchylnejšie na poškodenie. Rezy by tiež nemali obsahovať vrásky, záhyby a iné artefakty, ktoré by mohli narúšať proces LCM.
Môže sa parafínový mikrotóm použiť na prípravu vzorky LCM?
Odpoveď je áno, parafínový mikrotóm možno použiť na prípravu vzorky LCM. Na zabezpečenie kvality sekcií a úspechu postupu LCM je však potrebné vziať do úvahy niekoľko aspektov.
1. Výber čepele
Výber čepele je rozhodujúci pre získanie vysoko kvalitných rezov tkaniva. Ostrá a čistá čepeľ je nevyhnutná na zabezpečenie hladkého rezu a minimalizáciu poškodenia tkaniva. Na prípravu vzorky LCM sa odporúča použiť vysokokvalitnú jednorazovú čepeľ špeciálne navrhnutú na parafínové rezy. Tieto čepele sú zvyčajne vyrobené z nehrdzavejúcej ocele alebo karbidu volfrámu a majú ostrú reznú hranu, ktorá môže vytvárať tenké, rovnomerné časti.
2. Hrúbka rezu
Ako už bolo spomenuté, ideálna hrúbka tkanivových rezov pre LCM je medzi 5 a 10 mikrometrami. Väčšina parafínových mikrotómov umožňuje nastaviteľnú hrúbku rezu, ktorú je možné nastaviť podľa špecifických požiadaviek postupu LCM. Je dôležité zabezpečiť, aby bola hrúbka rezu konzistentná počas celého procesu krájania, aby sa získali rovnomerné rezy.
3. Orientácia tkaniva
Správna orientácia tkaniva je nevyhnutná pre presné LCM. Tkanivový blok by mal byť orientovaný tak, aby boli bunky, ktoré sú predmetom záujmu, ľahko prístupné na disekciu. To si môže vyžadovať starostlivé orezanie tkanivového bloku a správne umiestnenie na skľučovadle mikrotómu.
4. Časť Adhézia
Aby sa predišlo oddeleniu tkanivových rezov počas procesu LCM, je dôležité zabezpečiť, aby rezy pevne priľnuli ku sklíčku. To sa dá dosiahnuť použitím vhodného klzného náteru alebo lepidla. Niektoré bežne používané sklzové povlaky zahŕňajú poly-L-lyzín, silán a želatínu. Tieto povlaky pomáhajú zlepšiť priľnavosť tkanivových rezov ku sklíčku a zabraňujú ich odplávaniu počas procedúry LCM.
5. Kvalita sekcie
Kvalita tkanivových rezov je rozhodujúca pre úspech postupu LCM. Časti by mali byť tenké, ploché a bez artefaktov, ako sú vrásky, záhyby a trhliny. Na dosiahnutie vysokej kvality rezov je dôležité dodržiavať správne techniky rezania, vrátane použitia ostrej čepele, nastavenia rýchlosti rezania a udržiavania stálej hrúbky rezu.
Výhody použitia parafínového mikrotómu na prípravu vzorky LCM
Použitie parafínového mikrotómu na prípravu vzorky LCM ponúka niekoľko výhod:
1. Kompatibilita
Parafínové mikrotómy sú široko používané v histologických a patologických laboratóriách a väčšina laboratórií je už vybavená týmito prístrojmi. To uľahčuje integráciu prípravy vzorky LCM do existujúcich laboratórnych pracovných postupov.
2. Nákladovo efektívne
Parafínové mikrotómy sú relatívne lacné v porovnaní s inými typmi mikrotómov, ako sú kryostatové mikrotómy. To z nich robí nákladovo efektívnu možnosť pre laboratóriá s obmedzeným rozpočtom.
3. Všestrannosť
Parafínové mikrotómy možno použiť na rezanie širokého spektra typov tkanív, vrátane tvrdých a mäkkých tkanív. Vďaka tomu sú vhodné pre rôzne aplikácie LCM vrátane výskumu rakoviny, neurovedy a vývojovej biológie.
Obmedzenia používania parafínového mikrotómu na prípravu vzorky LCM
Zatiaľ čo parafínové mikrotómy môžu byť použité na prípravu vzorky LCM, majú tiež určité obmedzenia:
1. Zachovanie tkaniva
Zalievanie do parafínu zahŕňa použitie vysokých teplôt a organických rozpúšťadiel, ktoré môžu spôsobiť určitý stupeň poškodenia a degradácie tkaniva. To môže ovplyvniť kvalitu nukleových kyselín a proteínov v tkanivových rezoch, čo ich robí menej vhodnými pre následnú molekulárnu analýzu.
2. Hrúbka sekcie
Hrúbka rezu parafínových mikrotómov je zvyčajne obmedzená na minimálne 2-3 mikrometre. To nemusí byť dostatočne tenké pre niektoré aplikácie LCM, najmä tie, ktoré vyžadujú izoláciu jednotlivých buniek alebo malých bunkových populácií.
3. Rozdelenie artefaktov
Parafínové rezy môžu niekedy viesť k artefaktom, ako sú vrásky, záhyby a slzy, ktoré môžu narúšať proces LCM. Tieto artefakty môže byť ťažké odstrániť, najmä pri práci s jemnými alebo vláknitými tkanivami.
Záver
Na záver možno povedať, že parafínový mikrotóm sa môže použiť na prípravu vzorky na mikrodisekciu laserového záchytu. Na zabezpečenie kvality sekcií a úspechu postupu LCM je však potrebné vziať do úvahy niekoľko aspektov. Výberom vhodnej čepele, úpravou hrúbky rezu, správnou orientáciou tkaniva, zabezpečením adhézie rezu a zachovaním vysokej kvality rezu je možné získať vysokokvalitné rezy tkaniva vhodné pre LCM. Hoci parafínové mikrotómy majú určité obmedzenia, ponúkajú niekoľko výhod, vrátane kompatibility, nákladovej efektívnosti a všestrannosti.
Ak máte záujem o kúpu parafínového mikrotómu na prípravu vzorky LCM alebo máte akékoľvek otázky týkajúce sa našich produktov, neváhajte nás kontaktovať pre viac informácií a prediskutovanie vašich špecifických požiadaviek. Zaviazali sme sa poskytovať vysokokvalitné mikrotómy a vynikajúce služby zákazníkom, aby sme vyhoveli vašim potrebám.
Referencie
- Emmert-Buck, MR, Bonner, RF, Smith, PD, Chuaqui, RF, Zhuang, Z., Goldstein, SR, ... & Liotta, LA (1996). Laserová záchytná mikrodisekcia. Science, 274(5289), 998-1001.
- Suarez-Quian, CA a Bonner, RF (2000). Laserová záchytná mikrodisekcia: základné princípy a aplikácie. Methods in cell biology, 61, 3-23.
- Mirlacher, M., & Speicher, MR (2001). Laserová záchytná mikrodisekcia: výkonný nástroj na molekulárnu analýzu vybraných bunkových populácií. Histochemistry and cell biology, 115(4), 299-306.